1，標準品的制備

標準(zhun)品(pin)的(de)制備(bei)是非常復雜的(de)問題，也是標記免疫(yi)分析中(zhong)比較難于制備(bei)的(de)一個(ge)成分。以(yi)下討論的(de)是實(shi)驗(yan)室標準(zhun)品(pin)(或商品(pin)化試劑中(zhong)標準(zhun)品(pin))的(de)制備(bei)。

（1）基質的制備：如前所述，作為標準品的介質(基質)成分應與被測樣品相同。對大多數用于測定血清中某物質的標準品，應用不含被測物質的零血清制備，以求反應的介質環境相當。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標準品用適當的緩沖液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質環境相近。

零值血清的制備方法有：

A、吸附法：血清中小分子物質如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質難以清除干凈，而且大分子活性物質不能用此法進行制備。

B、反復凍融法：對大分子活性物質可選用低值血清，經反復凍融使被測物質失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。

C、親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質量的零值血清，但本法比較復雜而且成本也高。

（2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應含有與被測物質有交叉反應的物質。

（3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據實驗系統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。

2，標準品的鑒定

（1）免疫活性的鑒定：選用高特異性(xing)的抗(kang)血清分(fen)別作公認標(biao)(biao)準品(pin)(如WHO的國(guo)際(ji)參考(kao)品(pin)或國(guo)家標(biao)(biao)準品(pin))的待(dai)鑒定(ding)標(biao)(biao)準品(pin)的劑量反應曲線，并觀(guan)察兩(liang)條曲線的平行(xing)性。如兩(liang)條劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線平行(xing)，說明兩(liang)種物質對(dui)同一抗(kang)體有相同的親(qin)和力，即二者是同質性物質。如兩(liang)條劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線不平行(xing)，說明兩(liang)種物質具有異(yi)質性，因而這一待鑒(jian)定的標準品是不能使用的。

（2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與公認的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量( ED50 )計算二者的換算系數，然后調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應曲線完全或基本重合為止。

3，標準品的計量

許(xu)多小(xiao)分子抗原(yuan)或半抗原已能得到純品(pin)或進行合(he)成，它(ta)們對(dui)作為標準品(pin)的(de)(de)(de)要求(qiu)可以得到基本的(de)(de)(de)滿(man)足，其計量(liang)(liang)(liang)多直接用單(dan)位(wei)體積中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。最(zui)近(jin)WHO推薦用質(zhi)量(liang)(liang)(liang)單(dan)位(wei)取代重(zhong)量(liang)(liang)(liang)單(dan)位(wei)，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對(dui)大分子的(de)(de)(de)活性物質(zhi)則比較復雜(za)。由于(yu)得不到絕對(dui)的(de)(de)(de)純品(pin)，故很(hen)難直接用單(dan)位(wei)體積中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)或單(dan)位(wei)體積中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)(liang)(liang)計量(liang)(liang)(liang)。因此，常用該(gai)物質(zhi)的(de)(de)(de)生物活性單(dan)位(wei)表示，如IU / L、mIU / L等。

4，標準品的穩定性與保存

如前所述(shu)，為保(bao)(bao)(bao)證檢(jian)測(ce)的連(lian)續可比(bi)性，每批(pi)標準(zhun)品(pin)應有相當大的量，以(yi)保(bao)(bao)(bao)證能(neng)在較長時(shi)間內使用。因此(ci)，每批(pi)標準(zhun)品(pin)應在適當的條件下保(bao)(bao)(bao)存，使其免疫活性和濃度保(bao)(bao)(bao)持穩(wen)定。

4.1 影響標準品穩定的因素：

（1）基質中的酶、細菌污染、pH的變化、氧化、潮濕等因素都可以導致標準品的變性，而且這些變化可因高溫和光照加速。

（2）在保存過程中發生聚合反應等分子結構的變化，可使標準品失活。

（3）容器內壁的吸附作用和溶劑的蒸發可造成標準品濃度的改變。

（4）保存條件不適當也可以影響標準品的穩定性，如反復的凍融可降低標準品的免疫活性等。

4.2 標準品的保存方法

（1）冷凍干燥法：冷凍干燥對標準品的濃度和免疫活性無明顯的影響，是目前最常用的保存方法。冷凍干燥制品在低溫下，可在較長的時間內保持穩定。但應用冷凍干燥制品時，復溶體積的準確度十分重要。因此，要用經過校準的量器準確的復溶，以減少標準品的濃度誤差。

（2）在(zai)標準品中(zhong)加一定量的防腐劑可減少細菌污染的影響。

（3）密閉真空保(bao)存或(huo)充入惰性氣體等方法也可以增加(jia)標(biao)準品的穩(wen)定性。目前最常(chang)用的方法是：在標(biao)準品中加(jia)入少(shao)量的防(fang)腐劑(如(ru)0.1%疊(die)氮鈉或(huo)0.1%硫柳汞)，冷凍干燥后密封，并(bing)(bing)在低溫下保(bao)存。但應注意(yi)，一旦復溶(rong)后應放低溫保(bao)存，并(bing)(bing)不得反(fan)復凍溶(rong)。復溶(rong)后的標(biao)準品其有效期明顯(xian)縮短，一般(ban)不超過6～8周，有些物質可能(neng)更短。